SA3800 次世代細胞光譜分析儀
特點
1. 螢光補償不存在
通過螢光光譜分離技術,可以將每個染料的螢光光譜分別拆開來,再單獨的計算。每個染料的螢光光譜都是獨立的。因此,並無螢光補償的問題存在。
2. 自動校準
自動化的設計,簡化了工作流程,包括儀器自動校準、軟體自動校正及品管報告產出,同時也確保數據結果的可信度。
3. 自體螢光辨識與去除
傳統的流式細胞分析儀是無法區分自體螢光訊號及弱染之螢光訊號。而這對SA3800而言,是一件很輕鬆容易辦到的事,因為每個染料的螢光光譜都是獨立的,只要將染料的光譜指紋總量單獨分析,計算出來即可。
4. 自動化3D上樣系統
SA3800的自動化上樣系統也採用全新的3D概念設計。突破傳統2D的方式。上樣盤除了水平前後左右移動外,也具備了上下移動方式,可以大大地減少樣本對樣本的交叉污染(sample-to-sample-cross contamination)。
簡易操控的使用介面
直觀的操作系統
SA3800軟體設計的非常簡單直觀,從設定、擷取到分析,許多步驟都自動化、智能化,大大簡化了工作流程。
螢光圖譜資料庫
傳統的螢光補償法(compensation),都必須在每次實驗時進行繁雜的個別染色(single-stain)測定以及設定相關的補償矩陣compensation matrix。而光譜分析技術並不需要使用帶通光學濾鏡及螢光補償矩陣分析,在多色分析研究上可保有最大的彈性應用。SA3800軟體的圖譜資料庫中有提供參考光譜,您只需將各螢光光譜從資料庫中叫出,就可快速進行多色實驗的解析作業,因此可大幅減低在個別染色測定上所花費的工夫。
儀器品管與螢光定量
只要依據簡單的精靈步驟(wizard)即可完成儀器的品質管控,包括自動計算MESF(可偵測的螢光分子)與QB(靈敏度與背景值的指標)的數據,並可自動產出Levey-Jennings chart報告。
光譜拆解技術 Spectral unmixing
採用光譜分析技術(Spectral Technonology),直接收集420nm到800nm的所有螢光訊號而成一個螢光光譜圖。光譜分析儀是以參考光譜為依據,將所量測出的螢光光譜拆解後,得到個別螢光染劑的光譜指紋,再將各螢光染劑的總量即時(real time)計算出來。此種方法客觀且螢光波長解析能力高,可以做到相鄰光譜或重疊(overlap)很明顯的螢光之識別,不會有訊號遺失或減損的問題,非常適合多色螢光分析、稀少細胞群分析及多重螢光蛋白的分析。
實例-自體螢光辨識與去除
相較於傳統帶通光學濾鏡方式,光譜拆解技術(Spectral Unmixing)可以減少假陽性的產生,而得到更精確的數據。以小鼠的脾臟細胞雙染CD4-APC及IL-2 PE為例。A圖為傳統流式分析所得到的2維點狀圖,圖中右上方淡藍色區域族群,並無法確定是弱PE群(dim PE)、弱雙染群(weak double positive)或者是非特異性結合(non-specific binding)。B圖為採用光譜拆解(unmixing)後所得到的2維點狀圖。兩相比較,很明顯的知道,圖中右上方淡藍色區域族群為高自體螢光族群。
系統自動化
可選配的自動化系統部份,包含了簡易的操作介面及簡單化的工作流程,並確保準確的結果。SA3800自動化系統支援各式各樣的上樣微孔盤及12x75mm 5ml tubes。
自動化上樣預混與保冷裝置
自動化上樣預混裝置可確保所有細胞皆懸浮在溶液中,保持樣本的穩定及完整性,以利持續性的上樣並得到一致的結果,適合大量的上樣檢體數使用,如96或384樣本。而保冷裝置可減少細胞變異,並可避免樣本隨著測量時間的推移而產生降解(degradation)。
以3um及10um的微珠(beads)混合樣本來說明使用SA3800自動化上樣預混裝置經過長時間等待,樣本仍然維持在原先均勻的懸浮狀態,確保可以得到一致的結果(上圖);反之,則有很大的差異(下圖)。
SA3800的樣本保冷裝置可使樣本在上樣80分鐘後仍然保持在室溫之下的冷溫狀態。
新穎的3D自動進樣技術
SA3800採用新穎的3D自動進樣技術設計,將採樣探針位置固定,使用可3D移動的上樣載台(包括前後、左右、上下移動)預混裝置。在探針上的感應裝置能夠準確的引導樣本移動到準確的上樣位置並能自動計算上樣管盤的深度,確保有效的取測樣本。
傳統的自動上樣系統採用移動上樣探針採樣的方式,需要有較長的取樣管路(longer tubing),容易導致阻塞,且有較高的樣本交叉污染機會,需要增加清洗的時間。SA3800新穎的3D自動進樣技術,克服了傳統上樣方式的缺點,可使樣本預混均勻,減少細胞沉聚而導致阻塞的可能;可以快速進行清洗並減少樣本交叉污染的可能。
應用領域
8色螢光表面抗原分析
使用3雷射光源(405nm,488nm,638nm)進行8色的單核細胞及淋巴細胞亞群分析,包括T cells, B cells, Th cells, Tc cells, NK cells and CD7+ functional NK cells。
6色螢光表面抗原分析
使用單一雷射光源(488nm)進行6色的單核細胞及淋巴細胞亞群分析,包括T cells, B cells, Th cells, Tc cells and NK cells。
連結
SA3800 spectral analyzer (flow cytometer)
文獻參考
Current Protocols in Cytometry